ATCC細(xì)胞傳代時(shí)間一般通過兩個方面進(jìn)行確定：一是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)液由于pH值下降而呈現(xiàn)黃色時(shí)，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到Z大密度，需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)；二是觀察細(xì)胞形態(tài)，健康細(xì)胞形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。初代培養(yǎng)的傳代很重要，是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時(shí)期。在傳代時(shí)一般要特別注意以下3點(diǎn)：

①ATCC細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞多為混雜生長，上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞并存的情況很常見。傳代時(shí)不同的細(xì)胞有不同的消化時(shí)間，因此要根據(jù)需要，注意觀察及時(shí)進(jìn)行處理，并可根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受時(shí)間不同而分離和純化所需要的細(xì)胞。另外早期傳代的培養(yǎng)細(xì)胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時(shí)間相對較長。吹打細(xì)胞時(shí)動作要輕巧，盡可能減少對細(xì)胞的損傷。

③傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些，使ATCC細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境有利于細(xì)胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳人新的培養(yǎng)瓶。