操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96906 |
商品屬性：
名稱 GC-1 spg (小鼠精原細胞) 別稱GC-1spg; GC-1; GC1-SPG 種屬小鼠 年齡（性別）10日齡 組織來源睪丸 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述Type B spermatogonia were immortalized by transfection with pSV3-neo (a plasmid containing coding sequences for the SV40 large T antigen and neomycin resistance) 生物安全等級2 生長培養基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:4-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
人 IL10Rb 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CD5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CD69 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 LRPAP1 / A2MRAP 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 AGT / SerpinA8 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 REN1 / Renin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 PRMT5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 FGFR2 / CD332 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 C
GC-1 spg (小鼠精原細胞)抗生素檢測培養基II Antibiotic Agar 2 250g
25g N-2- -N’-2- 乙基磺酸 HEPES，Free Acid 室溫保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human CD177 antigen
250mL BSA Blocking Buffer in TBS with Tween-20 BSA Blocking Buffer in TBS with Tween-20 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human C-telopeptide of Collagen alpha-1(II) chain
2 ug pMAL- c2x pMAL- c2x 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 18
BBL液體培養基 BBL Liquid Medium 250g
2 ug pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-ZsGreen1 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒
50T 豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人沉默調節蛋白4(SIRT4)ELISA試劑盒
500mL TBS-Tween-20 (TTBS),10X TBS-Tween-20 (TTBS),10X 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人神經黏附分子1（CD56/NCAM-1）ELISA試劑盒
素B用培養基 250g 15.6-1000 pg/mL 人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒
100次 植物總蛋白質微量提取試劑 (3DE) Plant Total Protein Miniprep Kit (3DE) 常溫保存 78-5000 pg/mL 人中性粒彈性蛋白(NE/ELA2/HNE)ELISA試劑盒
500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH9.0 Phosphate Buffer，0.2M, pH9.0 常溫保存 3.12-200 ng/mL 人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒
