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上海莼試生物技術有限公司
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細胞培養需在低溫培養箱進行

時間:2018/2/6閱讀:187
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細胞培養自噬作為一項真核生物*的生理現象, 開始應用于不同的領域。澳大利亞學者通過對果蠅自噬信號通路中上下游基因的敲除, 確定了自噬在果蠅程序性清除中腸中的重要作用。自噬與癌癥之間的一直是眾多學者關注的焦點, 美國學者通過在小鼠中突變自噬上游調節基因beclin1, 證實當 beclin1為雜合子時, 小鼠體內的腫瘤增長更迅速, 過表達beclin1則會抑制腫瘤的生長。

這些研究闡明了自噬的新功能, 開辟了新的研究方向, 也給了我們將自噬運用于低溫脅迫研究的靈感。本文對自噬的特異基因LC3進行標記, 通過檢測自噬小體*的LC3II自噬熒光點監測自噬出現的時間與強度。隨后, 將HeLa細胞放置于不同溫度的低溫培養箱中進行培養, 模擬自然界中的急性冷刺激。

在這種急性冷刺激下, HeLa細胞出現了不同程度的自噬熒光點聚集, 證實了低溫可以誘導細胞產生自噬, 且溫度越低, 出現自噬的時間越早, 出現的自噬程度越強。結合細胞低溫下的存活率結果, 發現細胞自噬狀態與細胞存活狀態之間密切相關, 在低溫脅迫下, 細胞先啟動自噬, 當細胞內的自噬慢慢減弱并開始消失時, 細胞開始出現死亡。

為了確定在低溫脅迫下, 細胞培養內自噬所擔當的角色, 使用 Bafilomycin A1阻斷了細胞自噬。自噬阻斷后, 低溫脅迫下的細胞提前開始死亡, 且細胞的存活率較未阻斷的細胞出現顯著性下調。這證明了細胞受到急性冷刺激時, 自噬可以保護細胞, 維持細胞的存活, 而這種保護開始減弱時, 細胞便開始死亡。
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細胞培養

 

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