大鼠肺泡巨噬細胞介紹
NR8383 (正常大鼠，1983年)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞。細胞在gerbil肺細胞連續培養液存在下培養了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細胞克隆并亞克隆NR8383細胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細胞表現出巨噬細胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，Fc受體，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重復地響應外源生長因子。NR8383細胞響應博萊霉素，分泌TGF-β前體。在博萊霉素刺激下，TGF –β mRNA表達也上升。細胞對內毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達50%。 即使達到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無毒且在后續過程中可逆的。NR8383細胞株提供了高響應的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細胞相關活性。
 
細胞特性
1） 來源：肺；巨噬細胞 
2） 形態：巨噬細胞，半懸浮生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
 
運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們。

細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） T25瓶中的培養基取出離心后，去上清，添加6ml新的*培養基，重新加入原T25培養瓶。
4） 如果細胞長滿90%請及時進行細胞傳代，傳代培養用本公司附帶的*培養基。
 
大鼠肺泡巨噬細胞細胞用途：僅供科研使用。
                       
細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；胎牛血清（熱滅活），15%；L-谷氨酰胺，2mM；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 將上清取出，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，取出上清，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 

注意事項：

1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。

3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.大鼠肺泡巨噬細胞所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。