TSZelisa試劑盒檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中為廣泛為靈敏的技術(shù)手段。可是在新老手操作過程中總是會出現(xiàn)或大或小的問題，本人在剛開始做ELISA時(shí)就面臨很多困難，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低,自己也為此苦惱過很長一段時(shí)間，隨著自己技術(shù)水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。下面就由我拋磚引玉地來說一下，做ELISA的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):

 1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱guo ye或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

 2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，TSZelisa試劑盒這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

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