Newcomer Supply 廣州鴻程代理

Newcomer Supply 廣州鴻程代理

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應用：

Newcomer Supply Funus, Grocott Methenamine Silver (GMS) Stain Kit 程序，包括微波修改，是展示多種真菌生物體的最佳染色方法之一，包括：肺孢子菌屬、曲霉屬、芽生菌屬、念珠菌屬和組織胞漿菌屬。

方法：

固定： 10% 福爾馬林，磷酸鹽緩沖液（第 1090 部分）
技術：  石蠟切片切成 4 微米。
解決方案：  所有解決方案均由 Newcomer Supply, Inc. 制造。

所有 Newcomer Supply Stain Kits 均設計為與按照下面提供的染色程序填充至 40 ml 的Coplin 罐一起使用。套件中的某些溶液可能包含額外的體積。

準備工作：

1. 如有必要，在烤箱中加熱干燥的組織切片/載玻片。

2. 所有玻璃器皿/塑料器皿在使用前必須進行酸洗。

1. 請參閱程序注釋 #1 和 #2。

2. 
   

3. 準備 Silver-Methenamine 工作溶液并充分混合。

1. 溶液 C：xiaosuanyin 20 毫升

2. 溶液 D：硼酸甲胺 20 ml

3. 
   

4. 使用前約 20 至 30 分鐘，在水浴中將銀-甲胺工作溶液預熱至 45°C-60°C。

1. 請參見程序說明 #3。

2. 如果使用微波改性，請勿預熱；步驟 11。

3. 
   

染色程序：

5. 用二甲苯更換三次，每次 3 分鐘，*脫蠟切片。通過 100% 和 95% 乙醇各兩次更換水合物，每次 10 次。用蒸餾水洗干凈。

1. 請參閱程序注釋 #4 和 #5。

2. 
   

6. 在溶液 A 中氧化：5% 鉻酸，水溶液 1 小時。

        微波改性：見程序注釋#6

1. 
   

1. 在裝有溶液 A：5% 鉻酸水溶液的塑料Coplin 罐中氧化載玻片， 并在 60°C 下微波 1 分 20 秒。

2. 
   

7. 用自來水沖洗干凈；用蒸餾水沖洗。

8. 放入溶液 B：1% 亞硫酸氫鈉水溶液中 1 分鐘。

9. 用自來水沖洗 5 分鐘；用蒸餾水沖洗干凈。

10. 在 45°C-60°C 或室溫下，將載玻片在預熱的 Silver-Methenamine 工作溶液（步驟 #4）中孵育 12-18 分鐘，直到切片呈現紙袋棕色。

1. 定期取出對照品，用溫蒸餾水沖洗，用顯微鏡檢查是否有足夠的銀浸漬。真菌應該是深棕色的。 

2. 如果生物體的顏色不夠深，請將載玻片放回溫銀溶液中。每隔 2-3 分鐘重新檢查一次，直到達到所需的強度。

3. 與其他真菌相比，肺孢子蟲的染色時間可能更長。

4. 在室溫下染色需要更長的孵育時間。

5. 
   

11. 微波改性：

1. 將載玻片放入裝有 Silver-Methenamine 工作溶液和微波的塑料Coplin 罐中，在 70°C 下孵育 1 分鐘。

2. 用顯微鏡檢查是否有足夠的發育。

3. 如果需要額外孵育，請將載玻片放回溫銀溶液中。每隔 2-3 分鐘重新檢查一次。

4. 
   

12. 用三到四次蒸餾水沖洗。

1. 在這一步切勿使用自來水。

2. 
   

13. 溶液 E 中的色調：氯化金 0.1%，水溶液直至切片變灰；20秒到1分鐘。

14. 用蒸餾水沖洗干凈。

15. 去除溶液 F 中的未還原銀：2% liudailiusuanna，水溶液 2 分鐘。

16. 用自來水沖洗 5 分鐘；用蒸餾水沖洗。

17. 溶液 G 中的復染劑：Light Green SF Yellowish Stain 0.2%，水溶液 2 分鐘。

18. 在 95% 和 100% 乙醇中的兩次更換中快速脫水。二甲苯三換清，每浸10次；蓋玻片與兼容的封固劑。

結果：

程序說明： 

1. 酸洗所有玻璃器皿/塑料器皿（第 12086 部分）并用蒸餾水多次更換*沖洗。

2. 塑料（第 5500 部分）、塑料尖頭或涂有石蠟的金屬鉗必須與任何銀溶液一起使用，以防止銀鹽沉淀。任何種類的金屬都不應與任何銀溶液接觸。只能使用玻璃溫度計。

3. 在較高溫度下染色意味著更快的顯影，但可能會導致在工作銀溶液中形成沉淀物并沉積在載玻片上。將銀溶液保持在 45°C-60°C 之間會減少沉淀。

4. 在每個步驟后排空載玻片以防止溶液殘留。

5. 在手術過程中的任何時候都不要讓切片變干。

6. 建議的微波程序已在 Newcomer Supply 進行了測試。此程序是一個指南，應開發用于您的實驗室的技術。

7. 如果使用二甲苯替代品，請嚴格遵循制造商關于脫蠟和清除步驟的建議。