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凍干多肽的溶解詮釋

時(shí)間:2023/8/17閱讀:288
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凍干多肽的溶解:
1、溶解多肽的*個(gè)原則是使用無(wú)菌蒸餾水或去離子水,應(yīng)溶解在無(wú)菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,應(yīng)溶于無(wú)氧的水中,無(wú)氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到;
2、若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。
3、若多肽含有多個(gè)堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:對(duì)于疏水性強(qiáng)的多肽,應(yīng)使用50%的乙酸;
4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基ma 啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。
5、異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有機(jī)溶劑的量必須很少否則將嚴(yán)重影響停留時(shí)間;
6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或?yàn)橹行噪臅r(shí),DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有利于多肽的溶解:
a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)而助溶;
b.膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會(huì)對(duì)其生物活性的研究工作造成干擾;
c.DMF是變性劑(濃度可達(dá)30%),滴加至多肽溶解;
d.反相層析法時(shí),DMF將與洗脫液前鋒一起流出,根據(jù)入量的多少,峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將很低。

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