組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
輪狀病毒B組檢測試劑盒（熒光PCR法） | 50T | YS-P013875 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
豚鼠蛋白Z(PROZ)己二酸二酯(>99.0%(GC))髓系觸發(fā)受體1抗體
豚鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX) 壬二酸二酯(>98.0%(GC))胰蛋白酶抑制劑抗體
豚鼠胸腺白血病抗原(TLA) 己二酸雙(2-丁氧)酯(>97.0%(GC))味覺感受器蛋白T2R6抗體
豚鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)油酸酯(>70.0%(GC))味覺感受器蛋白T2R38抗體
豚鼠成纖維生長因子7(FGF7/KGF)油酸酯(>95.0%(GC))5色氨酸羥化酶2抗體
豚鼠纖調(diào)蛋白(FMOD) 癸二酸二丁酯(>98.0%(GC))硫氧還蛋白11抗體
豚鼠鈣調(diào)素(CAM) 癸二酸二酯(>97.0%(GC))微管蛋白4α抗體
豚鼠心肌營養(yǎng)素合成酶/心磷脂合酶(CLS) 癸二酸二正辛酯(>95.0%(GC))動力蛋白輕鏈
豚鼠鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)三二二（添加穩(wěn)定劑BHT）(>98.0%(GC))腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體
豚鼠受磷蛋白(PLN)二二二丁(>98.0%(GC))血小板生成素受體抗體
豚鼠膜橋蛋白 二二二酸酯(>98.0%(GC))跨膜絲氨酸蛋白酶5抗體
豚鼠胰多肽(PP) 二酸二甘酯(>97.0%(GC))脫中胚蛋白抗體
豚鼠脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)三丁酸甘油酯(>98.0%(GC))生長抑制因1蛋白抗體
豚鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)三甘二酸酯(>98.0%(GC))狀腺素T4抗體
豚鼠酮酸脫氫酶E1(PDH E1)O-酰蓖麻酸酯(>80.0%(GC))轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體
豚鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG-1)檸檬酸三酯(>99.0%(GC))雙加氧酶TET2抗體
輪狀病毒B組檢測試劑盒（熒光PCR法）Phospho-eNOS (Ser1177) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體（內(nèi)皮型）IgG2-吡啶酸 98%
Phospho-eNOS (Ser113)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體（內(nèi)皮型）IgG4-吡啶 97%
Notch1/MOTC /FITC 熒光素標(biāo)記跨膜受體蛋白Notch-1抗體IgG誘蟲烯 93%
Notch3/FITC 熒光素標(biāo)記跨膜受體蛋白Notch-3抗體IgG 農(nóng)殘級, ≥99.9%(GC)
Nox-4/NADH /FITC 熒光素標(biāo)記NADPH氧化酶4抗體IgG己二酸二酰肼 98%
NPPC/FITC 熒光素標(biāo)記促尿鈉排泄肽前體C抗體IgGN-叔丁烯酰 97%
NP/FITC 熒光素標(biāo)記任酚抗體IgG正丁 for HPLC，≥99.7% (GC)
NPM/FITC 熒光素標(biāo)記核仁磷酸蛋白抗體IgG正丁 農(nóng)殘級
