參數規格:
產品貨號:YS-P013733
產品規格:50T
產品分類:PCR檢測試劑盒
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
特點優勢:
1. 特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐
的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.公司產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
猴優球蛋白(EL) 拉西地平腫瘤轉移抑制因H4抗體
猴26S蛋白酶體(26S-PSM) 尼麥角林(標準品)神經元衍生孤兒受體1抗體
猴磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC3) 鹽酸賽洛唑啉(標準品)軸突生長誘向因子4抗體
猴蛋白激酶Cα相互作用蛋白α1(PICK1)鹽酸賽洛唑啉脊髓灰質炎病受體相關蛋白4抗體
猴顆粒酶A(GzmA) 磷酸二氫(標準品)核因子/k因結合核因子 p52/p100抗體
猴可溶性CD14分子(sCD14)長春(標準品)線粒體復合物NDUFS7蛋白抗體
猴成纖維生長因子7(FGF7/KGF)鹽酸咪達普利(標準品)尼曼匹克C2前體蛋白抗體
猴生長調節致癌因β(GROβ) 磷酸哌喹(標準品)煙酰腺嘌呤二核苷酸酶1抗體
猴間隙連接蛋白β1(GJβ1)西沙必利(標準品)一氧化氮合成酶-1抗體(神經型)
猴微管相關蛋白2(MAP-2)奧美拉唑鈉一水合物(標準品)轉錄因子相關蛋白NKX6.1抗體
猴血管內皮生長因子165 (VEGF165)鹽酸地匹福林(標準品)造血蛋白1抗體
猴端粒酶逆轉錄酶(TERT)麥冬黃酮A(標準品)骨巢蛋白抗體
猴泛素交叉反應蛋白 (UCRP)噴昔洛韋(標準品)NUP54抗體
猴磷脂酰肌蛋白聚糖1(GPC1) 貝那普利拉/那普利拉(標準品)親核素β1抗體
猴S100鈣結合蛋白A7 (S100A7) 醋氯芬酸(標準品)谷氨酸受體NMDAζ1抗體
猴干因子受體(SCFR/c-Kit)TG101209谷氨酸受體NMDAζ2抗體
流感病毒H12亞型檢測試劑盒(熒光PCR法)eIF2 alpha/FITC 熒光素標記真核啟動因子2α抗體IgG硅酮 DC-550 GC
eIF4E/FITC 熒光素標記真核翻譯起始因子4E抗體IgG磺醋酰 分析標準品
phospho-eIF4E(pSer209)/FITC 熒光素標記磷酸化eIF-4E(Ser209)抗體IgG磺氯吡 分析標準品
HBA1/Gold 金標記抗人血紅蛋白α1抗體IgG磺吡啶 分析標準品
Elastin/FITC 熒光素標記抗彈性蛋白抗體IgG西瑪津 分析標準品
ELAVL1/HuR/FITC 熒光素標記ELAVL1抗體IgG噻隆 分析標準品
Elastin/Gold 金標記抗彈性蛋白抗體IgG鹽酸四環素 分析標準品
ELK1/FITC 熒光素標記轉錄因子ELK1抗體IgG誘蟲烯 分析標準品