細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96998 |
商品屬性：
名稱 雞卵泡基膜細胞 2.組織來源：雞卵泡組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 雞卵泡基膜細胞分離自雞卵泡組織；成熟卵泡是卵巢的組織結構成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明顯。卵泡內膜細胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔，內膜細胞呈多邊形，胞質清亮，胞核圓形，細胞間可見許多毛細血管，外膜細胞位于最外層，多呈梭形，與周圍結締組織分界不明顯。卵泡（follicle）中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞，在卵泡開始發育、卵細胞成長的同時，周圍的菱形細胞變為立方形，并由單層增生成復層，因其細胞漿內含有顆粒，故稱為顆粒細胞。初級卵泡的顆粒細胞為單層；次級卵泡的顆粒細胞增至復層；成熟卵泡的顆粒細胞展開又變為單層。顆粒細胞的胞核大而圓，著色深，細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部。 5.方法簡介： ()實驗室分離的雞卵泡基膜細胞采用先機械分離后膠原酶反復消化法、并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的雞卵泡基膜細胞經3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-C002 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白
重組人 CCL27 / CTACK 蛋白 (His 標簽)
重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標簽)
重組狗 CXCL13 / BCA-1 蛋白 (His 標簽)
重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白
重組食蟹猴 IL-8 / CXCL8 蛋白
重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白
重組小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白
重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白
重組食蟹
雞卵泡基膜細胞Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG/Gold 膠體金標記的兔抗人IgG 規格: 0.5mlPHKG2 磷酸化激γ2 規格: 0.2ml
Ramulus mori桑枝染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周API2 凋亡抑制因子2抗體 規格: 0.2mlGRIM19 干擾素/維甲酸誘導凋亡相關基因抗體 規格: 0.1ml
Porphyromonas gingivalis 牙齦卟啉單胞LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ZWILCH 著絲粒ZWILCH蛋白抗體 規格: 0.2mlLRPAP1/MRAP 脂蛋白受體相關蛋白抗體（脂蛋白相關蛋白的相關蛋白1） 規格: 0.1ml
Clostridium chauvoei氣腫疽梭狀芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Bcl-2 Bcl-2抗體 規格: 0.1mlCCL23/MIP3 巨噬細胞性蛋白抗體 規格: 0.1ml
Fructus toosendan川楝子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Phospho-IRAK1 (Thr387) 磷酸化白介素-1受體相關激1抗體 規格: 0.1mlC19orf47 19號染色體開放閱讀框47抗體 規格: 0.2ml
Rhodococcus equi馬紅球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Aldolase C 醛C抗體 規格: 0.2mlHPV16-E7 人類狀瘤毒16-E7抗體 規格: 0.2ml
O'nyong-nyong Virus(ONNV)阿尼昂-尼昂病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ADCY9 苷酸環化9抗體 0.2mlCAMK1D 鈣調蛋白激CaMK1D抗體 規格: 0.2ml
Radix sanguisorbae地榆LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CTGF 結締組織生因子抗體 規格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP 辣根過氧化物標記的羊抗小鼠IgG 規格: 0.1ml
Listeria spp.李斯特通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PLAGL1/ZAC1 多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規格: 0.2mlC17orf42 17號染色體開放閱讀框42抗體 規格: 0.2ml
Sammarez Reef病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周UXT/Ubiquitously expressed transcript 廣泛表達轉錄蛋白UXT抗體 規格: 0.2mlBEND5 BEN結構域蛋白5抗體 規格: 0.2ml
