細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
公司向您推薦PrimaCell™小鼠肺微血管內皮細胞試劑盒說明書的詳細說明：
產品名稱 | PrimaCell™小鼠肺微血管內皮細胞試劑盒說明書 |
規格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6760 |
細胞株的培養和傳代培養：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10％小牛血清和抗生素的培養液中，培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養，根據細胞生長特性，在適當的時候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養上清液，用新鮮培養液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續培養。
?
實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
膠原酶潛酶活化劑（APMA） 進口/國產 規格：500微升
動物細胞鈣鎂ATP酶（Ca＋＋/Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次
EDTA三鉀血抗凝 進口/國產 規格：100毫升
羥賴氨酸（HYL）含量高效相色譜定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次
植物ATP生物發光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：50次
細菌抗生素（多粘霉素E）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次
PDGF-A蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 進口/國產 規格：5次
體外非細胞系統細胞色素P450亞酶CYP2A（COD）活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次
細胞GSK-3ALPHA蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：10/50 次
維生素B2高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次
真菌/酵母細胞總RNA分離試劑盒 進口/國產 規格：20次
牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產 規格：2次
PrimaCell™小鼠肺微血管內皮細胞試劑盒說明書4-溴正癸分子式：297.28英文名稱：4- decyl benzene bromide號：106418-67-1分子量： C16H25Br
馬噴特羅英文名稱：Ma Tero分子式：361.23分子量： C14H20ClF3N2O · HCl號：54238-51-6
氟洛芬英文名稱：Fluparoxan分子式：358.21分子量： C12H14Cl2FNO4S號：76639-94-6
溴酚紅英文名稱：Dibromophenol分子式：512.17分子量： C19H12Br2O5S號：2800-80-8
β-倒捻子素英文名稱：Beta a-mangostin分子式：424.4902分子量：C25H28O6號：20931-37-7
2,3-二吡分子式：109.13英文名稱：2,3- two號：452-58-4分子量： C5H7N3
5-溴-2-甲并噻唑分子式：228.11英文名稱：5- bromo -2- Methylbenzothiazole號：63837-11-6分子量： C8H6BrNS
1,4-雙(4--2-三氟氧)分子式：428.33英文名稱：1,4- bis (4- amino group -2- three號：94525-05-0分子量： C20H14F6N2O2
1-(4-芐)咪唑分子式：173.21英文名稱：1- (4-)號：56643-85-7分子量： C10H11N3
5-溴-2-氯嘧分子式：193.43英文名稱：5- -2- chloride號：32779-36-5分子量： C4H2BrClN2
2-乙吡分子式：105.13英文名稱：2- vinyl pyridine號：100-69-6分子量： C7H7N
