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用Trizol法提取RNA的實驗步驟

來源:北京百奧創新科技有限公司   2023年09月18日 16:18  

RNA是目前發現細胞內生物功能豐富多樣的生物大分子,同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁,因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。今天我們一起來了解一下用Trizol法提取RNA的實驗步驟
以提取組織細胞為例:

1.提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5~106個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞;

2. 將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30℃下放置5分鐘;

3. 在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯fang的量加入氯fang,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2~8℃)離心15分鐘;

4.去上層水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15~30℃)放置10分鐘后,12000g(2~8℃)離心10分鐘;

5.棄上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2~8℃)離心5分鐘,棄上清;

6.讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥;

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA檢測

(1) RNA的電泳圖譜,電泳的目的是在于檢測28S、18S、5S條帶的完整性和他們的比值,一般的,如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利,并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,我們認為RNA的質量是好的。

(2) 測定樣品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA計算RNA的產量,一般的OD260/OD280在1.8-2.0范圍,我們認為RNA的質量是好的,如果R<1.8,說明溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯,如果R>2.2,說明RNA已經水解成單核酸了。

以上就是用Trizol法提取RNA的實驗步驟的方法,更多有關于核酸提取的問題請咨詢百奧創新客服!


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