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純化快槍手-徑向色譜技術

來源:廣州市艾貝泰生物科技有限公司   2022年11月23日 11:39  

01徑向色譜技術

徑向流色譜柱流動相攜帶樣品沿徑向遷移。在徑向流色譜柱內,流動相和樣品可以從色譜柱的周圍流向柱圓心,也可以從柱圓心流向柱的周圍。

基于徑向流色譜技術。柱子有三個環形通道(如Figure.1),內外通道橫截面積相等并將流體引至出口,中間通道裝載色譜填料。

 

Superflo®柱基于徑向流色譜技術。由于外通道的橫截面積較大且床層深度較低,所以Superflo®柱可支持非常高的流速和非常低的運行壓力。
 

徑向工藝和傳統軸向工藝分離卵清蛋白的系統壓力比對

Peter R L? Large-scale ion-exchange column chromatography of proteins Comparison of different formats[J]?Journal of Chromatography B,2003,790:17~33

 

徑向層析工藝(Radial)運行時的系統壓力顯著低于同體積的傳統軸向工藝(Axial,尤其是工藝放大后的高體積流速表現更佳。

與傳統色譜柱相比,徑向色譜優勢明顯,具體如下:

  • 反壓更低、流速更快,層析時間節省4倍以上

  • 易于放大,放大后占地更小

  • 更好的柱效及分離趨勢

  • 防止濃度依賴沉淀和蛋白降解,提高收率

  • 易于使用,無需拆卸即可實現填料安裝和卸除

 


02徑向色譜有多快

案例1:陰離子交換分離大腸桿菌表達胞內酶

微信圖片_20221118124909.png

CourtesyGenencor Corp

圖中可見,徑向色譜層析時間相對于傳統軸向色譜縮短了約7倍,并且處理了更大體積的樣品,效率獲得巨大提升。

 

案例2:徑向工藝和傳統軸向工藝疏水層析柱分離蛋白比對

CourtesyUniversity of Nebraska

表中可見,傳統軸向工藝層析時間是徑向工藝的18倍。

 

03徑向流技術的高流速會影響載量嗎?

填料動態載量受到結合流速影響,徑向色譜技術得益于其設計可以大幅提升線性速度,但這是否會帶來動態載量的顯著下降?答案是否定的,請見以下數據。

4種填料對于徑向色譜保留時間的測試

使用圖中4種填料進行徑向色譜保留時間的測試,保留時間分別設置2、4、8min,數據如下所示:

表中可見,保留時間由8min降低至2min, 效率提升4倍,動態載量依然保持在80%左右,另外個別廠商裝柱高度較高,反壓大,保留時間甚至超過10min, 這種情況使用徑向色譜具有更加廣闊的效率提升空間。


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