乳、乳制品及飼料中三聚氰胺的測定

一．名詞簡介

1.  三聚氰胺理化性質

三聚氰胺：英文名“melamine”，簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3；分子量：126.12；物理性能：白色結晶粉末，無毒，無味；相對密度：1570kg/m³；熔點：在常壓下，354℃分解；升華溫度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性。

化學性能：三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反應生成三聚氰胺鹽；在強酸或強堿液中，三聚氰胺發(fā)生水解，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺與醛類反應生成加成化合物；三聚氰胺與甲醛反應制成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產塑料、地板磚，廚房用具，防火纖維，商業(yè)濾膜，膠水和阻燃劑。

2.  乳制品

是指以生鮮牛（羊）乳及其制品為主要原料，經加工而制成的各種食品。本標準所指的乳制品包括液體乳類（殺菌乳、滅菌乳、酸牛乳、配方乳）、乳粉類（全脂乳粉、脫脂乳粉、全脂加糖乳粉和調味乳粉、嬰幼兒乳粉、其他配方乳粉）、含乳飲料類、煉乳類（全脂無糖煉乳、全脂加糖煉乳、調味煉乳；配方煉乳）、乳脂肪類（稀奶油、奶油、無水奶油）、干酪類（原干酪；再制干酪）、乳冰淇淋類（乳冰淇淋、乳冰）和其他乳制品類（干酪素、乳糖、乳清粉、濃縮乳清蛋白）等。

二．液相色譜法測定

1.  原理

    試樣經溶解、超聲提取、沉淀蛋白、過濾得到測試液，經液相色譜測定，根據保留時間和紫外吸收光譜定性，根據峰面積進行定量。

2  試劑

方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純試劑，水為GB/T 6682-2008中一級用水，溶液為水溶液。

2.1  磺基水楊酸。

2.2  檸檬酸。 

2.3  辛烷磺酸鈉：液相色譜離子對試劑。 

2.4  乙腈：色譜純。

2.5  鹽酸。 

2.6  60 g/L磺基水楊酸：稱取60 g磺基水楊酸用水定容至1 L。

2.7  0.1 mol/L鹽酸：量取8.3 mL鹽酸用水稀釋至1 L。

2.8  緩沖液：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L。

2.9  三聚氰胺標準品：已知含量大于99%。

2.10 標準儲備液：稱取三聚氰胺標準品0.01g（準確至0.0 001g），用甲醇配制成濃度為1mg/mL標準儲備液。

2.11 標準系列：將標準儲備液用0.1 mol/L鹽酸逐級稀釋至0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL的系列標準溶液。

3  儀器

3.1  液相色譜，附二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

3.2  天平：感量0.01 g。

3.3  分析天平：感量0.0 001 g。

3.4  高速離心機：轉速>4 000 r/min。

3.5  *。

3.6  旋渦混勻器。

4  樣品處理

4.1  固態(tài)乳制品

稱取1.0 g左右試樣（準確至0.0 001 g），加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣。

4.2  液態(tài)乳制品（包含酸奶）

稱取15 g左右試樣（準確至0.0 001 g），加入60 g/L磺基水楊酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣。

4.3  飼料

稱取1.0g左右試樣（準確至0.0 001 g），將樣品用研缽充分碾碎混勻，加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣。

5  測定步驟

5.1  色譜條件

5.1.1  色譜柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 µm。

5.1.2  流動相：緩沖液︰乙腈=85︰15。

5.1.3  流速：1.0 mL/min。

5.1.4  柱溫：40 ℃。

5.1.5  波長：240 nm。

上述色譜條件是典型的，可根據實際情況做具體調整。如果分離效果不理想，將水相改為：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L，加3mL三氯乙酸，配制成1000mL溶液，流動相用氨水調PH值3.9到3.95。

5.2   測定

5.2.1  標準曲線制備

將標準系列0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL分別進樣20 µL,以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標作圖，制作標準曲線。

5.2.2  樣品測定

取制備好的試樣溶液進樣20 µL,進行液相色譜分析。根據保留時間和紫外吸收光譜定性，根據峰面積進行定量。三聚氰胺的標準樣品色譜圖見圖1，液態(tài)奶樣品色譜圖見圖2，奶粉樣品色譜圖見圖3。

圖1  標樣色譜圖                           

儀器：山東金普分析儀器有限公司LC3000 

色譜柱：山東金普析儀器 250 mm×4.6 mm，5μm  

流動相：緩沖液︰乙腈=85︰15，用三氯乙酸調PH3.9 

流速：1.0 mL/min      

柱溫：40 ℃       

波長：240 nm 

圖2  液態(tài)奶樣品色譜圖                           

儀器：山東金普分析儀器有限公司LC3000 

色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5μm  

流動相：緩沖液︰乙腈=85︰15，用三氯乙酸調PH3.9 

流速：1.0 mL/min 

柱溫：40 ℃ 

波長：240 nm