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蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。
注意事項(xiàng):
建議加樣順序是陰性質(zhì)控品、待檢樣本、陽性質(zhì)控品。4. PCR擴(kuò)增(擴(kuò)增區(qū))
1) 儀器設(shè)置(以ABI Prism 7500為例)
將PCR反應(yīng)管放入PCR儀內(nèi),按照對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品(NTC)、陽性質(zhì)控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM,Quencher Dye為None,參比染料(Passive Reference)為None。
2 ) 擴(kuò)增程序
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