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在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體--聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標禽ELISA試劑盒第二抗體0.1ml,37℃孵育30~60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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