牛輪狀病毒（RV）試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：

本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中輪狀病毒（RV）表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛輪狀病毒（RV）表達(dá)。用純化的牛輪狀病毒（RV）

抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中輪狀病毒（RV）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合

的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的輪狀病毒（RV）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體

復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸

的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF

值相比較，從而判定標(biāo)本中牛輪狀病毒（RV）的存在與否。

牛輪狀病毒（RV）試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8陽性對(duì)照0.5ml×1瓶

3酶標(biāo)包被板12孔×8條9陰性對(duì)照0.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

牛輪狀病毒（RV）試劑盒操作步驟

1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50µl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

牛輪狀病毒（RV）試劑盒操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為輪狀病毒（RV）陰性

陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為輪狀病毒（RV）陽性

。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照牛輪狀病毒（RV）試劑盒說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須

注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月