溫育是ELISA測定中影響測定勝敗zui為要害的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的反響在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*，必須在必定的溫度條件下反響必定的時刻。溫育所需時刻與溫度成反比，即溫度越高，則所需時刻相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。

溫育這一步是實驗ELISA測定中zui簡單出現疑問的過程。一般目前國內ELISA產品試劑盒的反響溫育時刻為37℃ 30分鐘～1小時，進口ELISA試劑盒則一般為37℃ 1～2小時才干有較*的，低于1小時，也許會影響測定下限。因而，對于溫育，在實踐測定操作中必定要留意以下幾點：
要確保在設定的溫度下有滿足的反響時刻。一般來說，加完樣本和/或反響試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃，需求必定的時刻，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態下，這段升溫時刻也許還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人留意這個疑問，一般是將微孔板一放入溫箱即開始 計時，這樣就很簡單形成實踐測定中溫育時刻不行，弱陽性樣本測不出來的疑問。

曾有一地處南邊的血站同行提出了一個疑問，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時刻，在做HBsAg測定的室內質控中，測定由衛生部臨床查驗中心供給的1 ng/ml弱陽性樣本時，老是測不出來，不知原因為何？這也許就與南邊冬季室內溫度較低有關，此刻微孔板轉入溫箱后37℃溫育時刻不行，致使弱陽性樣本測定為陰性。因而，為確保37℃下滿足的溫育時刻，臨床實驗室可自行確定本實驗室不一樣時節（不一樣室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長時刻孔內溫度才干到達37℃，從而恰當延伸板條在溫箱中的放置時刻。詳細的做法是，用一小溫度計放置板孔反響溶液中丈量調查即可。