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RNA和DNA提取實驗中都有哪些問題呢?

時間:2023/11/17閱讀:463
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核酸提取是分子生物學實驗中重要的實驗步驟。因為我們在分子生物學中所做的幾乎所有事情在開始都需要DNA或 RNA,無論是qPCR、分子克隆、下一代測序還是其他任何東西。 那么RNA和DNA提取實驗中都有哪些問題呢?一起來學習一下吧!



1.產量低

如果您遇到的DNA/RNA產量低于您對樣品的預期,則需要考慮許多因素。通常,這是一個裂解問題。不wan全裂解是產量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優質乙醇(100% 200標準)稀釋緩沖液或添加到結合的步驟。劣質乙醇或舊庫存可能已經吸收了水分,并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確,您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。

2.低純度

如果提取的DNA被蛋白質污染(低260/280),那么您可能開始時樣品過多,而蛋白質沒有wan全去除或溶解。

如果DNA的260/230比率不佳,則問題通常是結合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質量的乙醇來制備洗滌緩沖液,如果問題仍然存在,請再次洗滌色譜柱。

與其他樣品相比,一些樣品含有更多的抑制劑。環境樣品特別容易出現純度問題,因為腐殖質在提取過程中會被溶解。

腐殖質的行為與DNA相似,很難從硅膠柱中去除。

3.降解

降解問題是RNA制備中常常到的問題。因為在RNA提取過程中,樣品儲存不當或裂解效率低等情況都會導致降解。對于DNA提取,降解不是一個大問題,因為對于PCR,DNA可以被剪切并且工作正常,如果不希望有較多剪切的DNA,可以使用弱裂解的方法。

以上就是有關于RNA和DNA提取實驗中都有哪些問題的解答,如果你想了解更多請咨詢百奧創新客服哦~


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