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PCR是怎樣完成擴(kuò)增的呢?PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction),實(shí)驗(yàn)過(guò)程是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物的共同參與下,將該段DNA擴(kuò)增至足夠的數(shù)量,以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能的分析。
若我們想要分析/探索基因的遺傳信息,則需要大量的DNA片段,例如動(dòng)物的組織;兇手的毛發(fā)、血液、皮膚;古生物;歷史殘骸;患者的組織等,可能只能分離出少量的DNA,若想研究其遺傳信息,有著很大的阻礙和困難,在1985年,出現(xiàn)了一種方法:可以在短時(shí)間內(nèi)大量復(fù)制DNA片段,此方法為PCR,它能將很微量的遺傳物質(zhì)在數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增數(shù)百倍達(dá)到檢測(cè)水平,那么PCR是怎樣完成擴(kuò)增的呢? 讓我們來(lái)一起學(xué)習(xí)一下吧!
1.高溫變性
變性的目的是使模板DNA雙鏈解旋成為單鏈以便與引物結(jié)合。此步驟將溶液加熱至94-98C并保持20-30秒,破壞兩條鏈之間的氫鍵并生成單鏈 DNA 分子;同時(shí)也激活了DNA 聚合酶,該步驟的時(shí)間取決于所使用的聚合酶。
2.低溫退火
退火溫度取決于所用引物的Tm,一般比引物Tm低3-5C左右。該步驟將持續(xù)約 20-40 秒,當(dāng)反應(yīng)溫度隆低到50-65C時(shí),引物與互補(bǔ)的DNA單鏈序列形成氫鍵,DNA聚合酶會(huì)結(jié)合至引物-模板雙鏈處開(kāi)始DNA合成。
3.中溫延伸
延伸時(shí)間取決于目的DNA片段的長(zhǎng)度和DNA聚合酶的合成能力。一般而言DNA聚合酶每60秒能夠合成1kb長(zhǎng)度的DNA。DNA模板-引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下,沿著5’一3’的方向合成一條與模板DNA鏈互補(bǔ)的鏈。延伸時(shí)的溫度通常為72C。
以上就是關(guān)于PCR是怎樣完成擴(kuò)增的問(wèn)題解答,如果有更多關(guān)于PCR技術(shù)的問(wèn)題,歡迎大家給小編留言~
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