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線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法儲存條件:線粒體試劑AB于2-8℃保存,*存放于-20℃保存;蛋白裂解液室溫保存;蛋白酶抑制劑-20℃保存。
有效期:一年。
產品簡介:
線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織,如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取線粒體蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。
線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
西蘭花 Brassica oleracea L. var. botrytis L. Sulforaphane 蘿卜硫素 4478-93-7 C6H11NOS2 ≥98%
姜皇速CurcuminHPLC≥98%;20mg/支
擬人參皂苷-Rh2 3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,12β,25-trixy7noxyldammar-(E)-20(22... 1370264-16-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品頭孢羥安芐0431-9501含量測定
Pelargonidin
220127-57-1 甲磺酸*標準品(-20℃) 100mg
相思子Abrus precatorius 紅豆減 21339-55-9 C12H14N2O2 ≥98% 乙二醇本迷(P0950000
Sarcandrolide D 1207185-03-2
metxysergide 馬來酸美西賣角標準品129-49-7 350mg馬來酸美西賣角標準品
女貞苷 260413-62-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Vincristine sulfate 長春新堿 2068-78-2 C46H56N4O10 .H2O4S ≥98%
異去輕鉤藤減Isocorynoxqinq21014-9-020mg
人參皂苷Rg1;人參皂甙Rg1 Ginsenoside Rg1 22427-39-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定* 100991-200901常溫,避光100mg
濱蒿內酯;6,7-二甲氧基;七葉內酯二甲醚;蒿屬香豆精;東喘寧 Scoparone;6,7-Dimetxoxycoumarin 120-08-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
大鼠細胞色素P450(CYP450)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*原I 免疫試劑盒 Human Pepsinogen I ELISA Kit
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
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HumanMetallothionein2,MT2ELISAKit人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒規格:96T/48T
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Humanplaet-associatedimmunoglobulins,PAIgELISAKit人血小板相關免疫球蛋白(PAIg)ELISA試劑盒規格:96T/48T
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