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113次海洋微生物菌種樣品的處理方法
1、 血清
血清是zui常用于ELISA檢測(cè)的一類(lèi)樣本,處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。
2、 血漿
用含抗凝劑的*或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、*和*等,檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。
3、 細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
4、 細(xì)胞裂解液
1) 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用*消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。
2) 收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3) 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4) 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
5) 4℃ 10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
5、組織勻漿液
1) 將組織樣本用PBS (0.01錨點(diǎn)錨點(diǎn)M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2) 將組織塊稱(chēng)重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
3) 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
4) 吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測(cè)。
海洋微生物菌種綿羊孕激素/孕酮(PROG)ELISA Kit 英文名: Sheep Progesterone,PROG ELISA Kit
綿羊游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA Kit 英文名: Sheep free tri-iodothyronine indes,FT3 ELISA kit
綿羊游離甲狀腺素(FT4)ELISA Kit 英文名: Sheep free thyroxine,FT4 ELISA kit
綿羊胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA Kit 英文名: Sheep insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit
綿羊胰島素(INS)ELISA Kit 英文名: Sheep Insulin,INS ELISA Kit
綿羊血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA Kit 英文名: Sheep Serum Amyloid A,SAA ELISA Kit
綿羊血管生成素2(ANG-2/ANGPT2)ELISA Kit 英文名: Sheep angiopoietin 2,ANG-2/ANGPT2 ELISA kit
綿羊褪黑素(MT)ELISA Kit 英文名: Sheep Melatonin,MT ELISA Kit
綿羊銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA Kit 英文名: Sheep Ceruloplasmin,CP ELISA Kit
綿羊甜菜堿-同型半*S-甲基轉(zhuǎn)移酶1(BHMT)ELISA Kit 英文名: Sheep Betaine--homocysteine S-methyltransferase 1,BHMT ELISA kit
綿羊髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA Kit 英文名: Sheep myeloperoxidase,MPO ELISA kit
綿羊雙氫睪酮(DHT)ELISA Kit 英文名: Sheep Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit
綿羊生長(zhǎng)激素(GH)ELISA Kit 英文名: Sheep Somatotropin,GH ELISA kit
綿羊三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA Kit 英文名: Sheep tri-iodothyronine(T3)ELISA kit
綿羊*(LZM)ELISA Kit 英文名: Sheep Lysozyme,LZM ELISA Kit
綿羊熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA Kit 英文名: Sheep heat shock protein 70,HSP-70 ELISA
綿羊皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA Kit 英文名: Sheep corticosterone,CORT ELISA kit
綿羊*(Cortisol)ELISA Kit 英文名: Sheep Cortisol ELISA Kit
綿羊內(nèi)皮素1受體(EDNRA)ELISA Kit 英文名: Sheep Endothelin-1 receptor,EDNRA ELISA ki
綿羊繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA Kit 英文名: Sheep Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone,MIS/AMH ELISA Kit
綿羊免疫球蛋白M(IgM)ELISA Kit 英文名: Sheep Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit
綿羊免疫球蛋白G(IgG)ELISA Kit 英文名: Sheep Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit
綿羊免疫球蛋白E(IgE)ELISA Kit 英文名: Sheep Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit
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