生物菌種實驗經(jīng)驗總結(jié)
1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素*:先親和素先包被載體，加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗具體來實踐。
生物菌種人血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒    Human Bradykinin,BK ELISA Kit
人血管生成抑制因子(Arresten)免疫試劑盒    Human Arresten ELISA Kit
人血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)免疫試劑盒    Human ANGPTL4 ELISA kit
人血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)免疫試劑盒    Human ANGPTL3 ELISA Kit
人血管生成素4(ANG-4)免疫試劑盒    Human Angiopoietin 4 ELISA Kit
人血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒    Human Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit
人血管生成素1(ANG-1)免疫試劑盒    Human Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit
人血管生長素(ANG)免疫試劑盒    Human Angiogenin,ANG ELISA Kit
人血管內(nèi)皮抑素抗體(ES-Ab)免疫試劑盒    Human anti-Endostatin antibody,ES-Ab ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒    Human VCAM-1 ELISA kit
人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)免疫試劑盒    Human VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)免疫試劑盒    Human VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit
人血管內(nèi)皮細胞生長因子E(VEGF-E)免疫試劑盒    Human vascular endothelial cell growth factor E,VEGF-E ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF165)免疫試劑盒    Human vascular endothelial cell growth factor,VEGF165 ELISA Kit
人血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)免疫試劑盒    Human vascular endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA kit
人血管內(nèi)皮生長因子121(VEGF121)免疫試劑盒    Human Vascular Endothelial Growth Factor 121,VEGF121 ELISA kit
人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)免疫試劑盒    Human VE-cad ELISA Kit
人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)免疫試劑盒    Human Angiotensin converting enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
人血管緊張素原(aGT)免疫試劑盒    Human aGT ELISA Kit
人血管緊張素Ⅱ受體2抗體(AT2R-Ab)免疫試劑盒    Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2 antibody,AT2R-Ab ELISA Kit
人血管緊張素Ⅱ受體2(AT2R)免疫試劑盒    Human AT2R ELISA Kit生物菌種