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ELISA試劑盒的包被方法

閱讀:152發(fā)布時(shí)間:2018-3-2

ELISA試劑盒直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步,因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,實(shí)驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn),重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用于。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以添加其吸附功能。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。換言之,包被便是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出,在這種情況下,直接包被作用欠安,能夠選用直接的捕獲包被法,即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被,這以后經(jīng)過(guò)抗原抗體反響使抗原固相化。也可用親和素*體系作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參加*化的DNA,這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí),已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
ELISA試劑盒IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)露出于外,因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。直接包被的另一長(zhǎng)處是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,抗心磷脂抗體的ELISA試劑盒一般選用這種包被方法。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴(lài)氨酸、*等作預(yù)包被,也可進(jìn)步核酸的結(jié)合力。
ELISA試劑盒脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)法與固相載體結(jié)合,可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后參加ELISA板孔中,開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或涼風(fēng)吹干,待酒精蒸發(fā)后,讓脂質(zhì)天然干固在固相外表。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附才能是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體外表。此直接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體外表,其抗原決定簇也得以充沛露出。

 


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