ELISA試劑盒生物學(xué)研討離不開定量。關(guān)于必定定量，一般需求運(yùn)用已知濃度的分子制造標(biāo)準(zhǔn)曲線。近來，研討人員介紹了一種新方法，能運(yùn)用串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)多個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行必定定量。
在MARQUIS方法中，關(guān)于每個(gè)待定量的肽段，研討人員樹立重同位素符號(hào)的肽段。他們以不一樣的量混合這些肽段，并在組織或細(xì)胞裂解后立即將一種混合物參與每個(gè)生物樣品中。研討小組的負(fù)責(zé)人認(rèn)為：“這是要害的一步。你要盡早參與這些肽段，這么重同位素符號(hào)肽段和內(nèi)源肽段的丟失可一同發(fā)作。
ELISA試劑盒隨后以同位素試劑符號(hào)樣品，并參與質(zhì)譜儀中。每個(gè)肽段發(fā)作兩個(gè)峰：“重”峰代表組成的（加標(biāo)）肽段，而“輕”峰代表內(nèi)源性蛋白。通過定量前者碎片化所發(fā)作的符號(hào)離子，研討人員能發(fā)作每個(gè)肽段的標(biāo)準(zhǔn)曲線。今后他們能測(cè)定對(duì)應(yīng)內(nèi)源性肽段的信號(hào)，判定樣品中存在多少分子。
研討小組運(yùn)用MARQUIS定量了EGFR信號(hào)通路中的*磷酸化。在幾種配體影響今后，他們?cè)诙鄠€(gè)時(shí)刻點(diǎn)定量了EGFR網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的磷酸化動(dòng)力學(xué)，完結(jié)了EGFR磷酸化位點(diǎn)的定量比照，并證明了關(guān)于每種配體，受體磷酸化在性質(zhì)上相似，但數(shù)量上不一樣。他們還培養(yǎng)了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤異種移植物，并運(yùn)用這種方法定量了EGFR激酶克制的作用。
據(jù)介紹ELISA試劑盒，MARQUIS能一同定量10個(gè)樣品中多達(dá)100種肽段。這只需求一臺(tái)串聯(lián)質(zhì)譜儀（如三重四級(jí)桿）、市售的同位素符號(hào)試劑，以及重同位素符號(hào)的組成肽段。每個(gè)人都能完結(jié)。咱們希望創(chuàng)建出一種適當(dāng)簡(jiǎn)略的方法，而不需求什么訣竅。
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