進(jìn)口原裝elisa試劑盒免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)相互作用的有效方法。 其基本原理是:細(xì)胞裂解液中加入抗體，與抗原形成特異免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗脫，收集免疫復(fù)合物，然后進(jìn)行SDS-PAGE及Western blotting分析。
一、蛋白樣品的準(zhǔn)備
1.對(duì)于10厘米細(xì)胞培養(yǎng)皿中的貼壁細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS洗滌一次，然后加入500微升至2毫升細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞。
2.對(duì)于組織樣品參考貼壁細(xì)胞使用裂解液的比例進(jìn)行裂解。
3.對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞后，PBS洗滌一次，然后參考貼壁細(xì)胞的裂解方法進(jìn)行裂解。
二、進(jìn)口原裝elisa試劑盒去除非特異性結(jié)合
1.取200微升至1毫升蛋白樣品，蛋白量約為200微克至1毫克，加入約1微克和免疫沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的普通IgG和20微升充分重懸的Protein A Agarose，4℃緩慢搖動(dòng)30分鐘至2小時(shí)。
2.2500rpm(約1000g)離心5分鐘，取上清用于后續(xù)的免疫沉淀。
三、免疫沉淀
1.加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃緩慢搖動(dòng)過(guò)一夜。
2.再加入20微升充分重懸的Protein A Agarose，4℃緩慢搖動(dòng)1-3個(gè)小時(shí)。
3.2500rpm(約1000g)離心5分鐘，或瞬時(shí)高速離心，小心吸除上清，注意寧可留下少量上清也不能吸掉Protein A Agarose。
4.用準(zhǔn)備蛋白樣品時(shí)的裂解液或PBS洗滌沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次為0.5-1毫升。洗滌時(shí)離心條件和吸除上清的要求同上面的步驟。
5.完成zui后一次洗滌后，去除上清，加入20-40微升1XSDS-PAGE電泳上樣緩沖液Vortex重懸沉淀，瞬時(shí)高速離心把樣品離心至管底。
6.100℃或沸水浴處理3-5分鐘，取部分或全部樣品用于SDS-PAGE電泳，暫時(shí)不用的樣品可以-20℃保存。
進(jìn)口原裝elisa試劑盒免疫共沉淀：參考免疫沉淀的方法進(jìn)行，但免疫共沉淀(co-IP)通常必須使用未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。普通的免疫沉淀雖然可以使用凍存的蛋白樣品，但也宜用新鮮的蛋白樣品為佳。
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