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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013819 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
星狀諾卡菌檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013819 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
兔葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4) 四化銨(>98.0%(T))環(huán)指蛋白121抗體
兔鈣調結合蛋白(CALD) 四己化銨(>98.0%(T))環(huán)指蛋白169抗體
兔和肽素(CPP) 四戊化銨(>98.0%(T))環(huán)指蛋白113A抗體
兔神經保護因子(CVNPF) 化锍(>98.0%(T))環(huán)指蛋白43抗體
兔GDP解離抑制因子1(GDI1)四庚化銨(>98.0%(T))腫瘤血管內皮標記蛋白2抗體
兔粒集落激因子(CSF3/GCSF)四化膦(>97.0%(T))環(huán)指蛋白14抗體
兔線粒體肌酸激酶1B(CKMT1B) 三丁化锍(>96.0%(T))RAS相關GTP結合蛋白A抗體
兔補體組分1Q受體1(C1qR1)2,3-雙(2,4,5--3-噻吩)馬來酐(>95.0%(T))絲氨酸蘇氨酸激酶1受體相互作用蛋白抗體
兔Ⅰ型膠原α1(COL1α1) 2,3-雙(2,4,5--3-噻吩)馬來酰亞P2凋亡相關蛋白抗體
兔胰島素原(PI)順-1,2-二-1,2-雙(2,4,5--3-噻吩)烯(>98.0%(N))DNA修復和重組蛋白RAD54B抗體
兔腫瘤蛋白P53(TP53)1,2-雙[2-并[b]噻吩-3-]-3,3,4,4,5,5-六氟-1-環(huán)戊烯(>97.0%(GC))畸胎瘤癌因RAS相關病抗體
兔質金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)1,2-雙(2,4-二-5--3-噻吩)-3,3,4,4,5,5-六氟-1-環(huán)戊烯(>98.0%(HPLC))Ras-GTP酶激活蛋白3抗體
兔VI型膠原α1(COL6α1) 1-(2-羥)-3,3-二吲哚啉-6'-并螺吡喃(>93.0%(HPLC)(T))神經內分泌特異性蛋白抗體
兔胱天蛋白酶4(P4) 螺[1,3,3-吲哚并二氫吡喃][光致變色化合物](>98.0%(HPLC)(T))視黃脫氫酶11/型肝炎病核心蛋白抗體
兔封閉蛋白3(CLDN3) 1,3,3-吲哚-6'-并二氫吡喃并螺烷 [光致變色化合物](>98.0%(HPLC)(T))維酸相關孤兒受體β抗體
兔信號傳導轉錄激活因子6B(STAT56B)螺[1,3,3-吲哚-(6'-溴并二氫吡喃)][光致變色化合物](>98.0%(T))G蛋白GTP-GDP解離激因子1抗體
星狀諾卡菌檢測試劑盒(熒光PCR法)phospho-Syndecan 4/FITC 熒光素標記抗磷酸化多配體聚糖4抗體IgG百里香酚酞 AR
KGFR/FGFR2/RBITC 紅色羅丹明標記角質形成生長因子受體/成纖維生長因子受體2抗體IgG百里香酚酞 indicator
KiSS-1R/GPR54/GPCR54/FITC 熒光素標記G蛋白偶聯(lián)受體54抗體IgG百里香酚蘭鈉 AR
Ki-67/FITC 熒光素標記Ki-67 Antigen抗體IgG1,1,1-三氯烷 包含0.05%C4H8O2穩(wěn)定劑,standard for GC,≥99.5%
Ki-67/FITC 熒光素標記Ki-67 Antigen抗體IgG二十四烷 AR
Kif14 protein /FITC 熒光素標記驅動蛋白家族Member14蛋白抗體IgG二十四烷 分析標準品, ≥99.5% (GC)
Kiss-1/FITC 熒光素標記腫瘤轉移抑制因抗體IgG二十四烷 99%
KIF17/FITC 熒光素標記驅動蛋白家族KIF17抗體IgG鹽酸鄰聯(lián) AR
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