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【試劑盒使用說明】

使用目的：
本試劑盒用于測定樣本中相應指標含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定樣本中指標的水平。用純化的指標抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入樣本，再與HRP標記的指標抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中指標）濃度。 
試劑盒組成
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標試劑    6ml×1瓶    8    標準品（160ng/L）    0.5ml×1瓶
3    酶標包被板    12孔×8條    9    標準品稀釋液    1.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張  
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個
標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ng/L    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40ng/L    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20ng/L    3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10ng/L    2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5ng/L    1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。