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細胞活性的檢測方法的優劣勢

時間:2018-9-7閱讀:893
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      小鼠ELISA試劑盒細胞活性的定義具有多樣性,通過對關鍵的細胞生理指標進行標記來進行檢測,如細胞代謝的活性(酯酶的功能,MTT法)、凋亡標記物(Annexin V)、細胞氧化還原電位、膜電位、增值率(DNA含量)、線粒體功能和膜的完整性等。雖然有如此多的指標參數,但是基于對細胞膜的完整性和相關的染料排斥發檢測,已經被廣泛的認為是作為細胞活性檢測的標準。應用廣泛的細胞膜完整性的檢測方法是臺盼藍染色法,該法早是基于顯微鏡下觀測并且手工計數,過程費事費力,并且計數的系統誤差較大。為了排除人工計數的誤差,增加計數過程的準確性,出現了基于儀器放大、拍照計數的方法。這樣提高了計數過程的自動化程度,但是依舊無法擺脫由于計數時焦平面的選擇、顆粒識別的準確性問題,并且容易高估細胞活性。為了解決這些問題,一些熒光染料被發明進行使用。該法能夠較臺盼藍染色提高100倍或者更高的檢測準確性與靈敏度。這類型的熒光染料中,碘化丙啶(Propidium Iodidi,PI)是應用廣泛的一種標準染料。

      與其他基于熒光染料標記的實驗一樣,該法的缺點就是需要使用熒光顯微鏡或者是流式細胞儀。前者要求配置一套熒光顯微鏡,相對應的激發光源以及濾光片,并且操作過程依舊是手工操作,人工計算實驗結果,過程耗時還無法避免人為的主觀因素。而流式細胞儀能夠準確的計數,并且進行統計學分析,但是設備昂貴,需要有經驗的實驗人員進行專門操作,以及需要一定的設備維護等問題。

      Orflo公司創新性的出了臺便攜的流式檢測系統,能夠提供高精度的PI活性檢測的實驗數據,儀器無需預熱,無需清潔與維護,檢測快速,不需要專門的儀器操作人員和相關背景知識的人員。Moxi Flow是世界上臺結合庫爾特原理(顆粒計數和粒徑分析)和單熒光通道(PMT)檢測的便攜流式。本文中將對幾種不同的細胞活性檢測方法進行比較。

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