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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>干細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)技術(shù):形態(tài)學(xué)檢測(cè)法
當(dāng)機(jī)體受到抗原的刺激時(shí),干細(xì)胞就可以轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)化在一定的程度上代表著機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。這種轉(zhuǎn)化也可在體外的T細(xì)胞的培養(yǎng)過程中加入適當(dāng)?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn),并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)作為檢查機(jī)體細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)。具體方法有形態(tài)學(xué)檢查法。
(一)操作方法
1. 于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加0.2ml馬血,對(duì)照組與試驗(yàn)組各做2瓶,試驗(yàn)組均加PHA 30?g;
2.37℃培養(yǎng)72h,每天輕搖1~2次;
3.取出培養(yǎng)瓶,搖散血,倒入離心管,3 000r/min離心10min,去上清液;
4.用血球泥制備推片,晾干;
5.以瑞氏染液染2min~3min,加等量緩沖液,混勻繼續(xù)染3min,蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min,餾水沖洗,晾干;
6.鏡檢,觀察,計(jì)數(shù)。
(二)注意事項(xiàng)
1.培養(yǎng)液Z適pH為7.2~7.4,過酸過堿都會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)而降低轉(zhuǎn)化率。培養(yǎng)液的類型與動(dòng)物的白細(xì)胞有關(guān),如小鼠的淋轉(zhuǎn)試驗(yàn),用RPMI-1640,用199液則不成功。
2.培養(yǎng)時(shí)間 以72h~120h轉(zhuǎn)化率Z高,超過這個(gè)時(shí)間,則轉(zhuǎn)化率反而下降。
3.吞噬細(xì)胞有時(shí)在形態(tài)上易與“過渡型"混淆。但巨噬細(xì)胞有其固有的特點(diǎn),核占細(xì)胞比較小且偏一邊,核染色質(zhì)濃集,細(xì)胞漿呈藍(lán)灰色或紅褐色,胞漿內(nèi)有大小不等的顆粒或吞噬物,且含有大小不等的氣泡。
4.涂片要少蘸些細(xì)胞,推出尾部來(lái),因淋巴細(xì)胞較大,易集中在尾部及邊緣。
5.觀察干細(xì)胞轉(zhuǎn)化,染色不要太濃,以便觀察核仁。
6.嚴(yán)格的無(wú)菌操作,是淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
100316-200402 檢查用 30mg 枸椽酸他莫昔芬E-異構(gòu)體
100317-200902 HPLC法含量測(cè)定 100mg 倍他環(huán)糊精
10318-200602 含量測(cè)定 100mg 卡托普利
10319-200602 檢查用 50mg 卡托普利二硫化物
100320-200401 含量測(cè)定 30mg 卡前列甲酯
100322-200101 含量測(cè)定 50mg 卡鉑
100323-200201 檢查用 100mg 氯氮平
100324-200001 含量測(cè)定 50mg 林旦
100325-200901 HPLC含量測(cè)定 100mg 氯碘羥喹
100326-200201 含量測(cè)定 50mg 聯(lián)苯芐唑
干細(xì)胞
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