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ATCC細胞生長指數期

時間:2018-3-30閱讀:218
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 ATCC細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。
單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期。
測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。
BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養基后,可做為細胞DNA復制的原料,經過兩個細胞周期后,細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經歷了三個周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細胞如果僅經歷了一個周期,則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例,就可算出細胞周期的值。
1、細胞生長至指數期時,向培養液中加入BrdU,使Z終濃度為10μg/ml。
2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
3、48小時后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。
4、常規染色體制片(見第三部分:染色體技術)。
5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6、棄去2×SSC液,流水沖洗。
7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
8、鏡檢100個分裂相,計*、二、三、四細胞期分裂指數。
9、計算:ATCC細胞周期(Tc)=48/(小時)
附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml   4℃下避光保存。
   (2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存
500mg    Pramoxine Hydrochloride    637-58-1     鹽酸普莫卡因標準品
500mg    Powdered Red Clover Extract        紅車軸提取物粉標準品
500mg    Powdered Ginger        生姜粉標準品
500mg    Powdered Forskohlii Extract        弗司可林粉末提取物標準品
500mg    Powdered Bilberry Extract        越橘提取物標準品
500mg    Powdered Andrographis Extract    90244-84-1    穿心蓮提取物標準品
500mg    Potassium Guaiacolsulfonate     78247-49-1     愈創木酚磺酸鉀標準品
500mg    Potassium Acetate (AS)    127-08-2     醋酸鉀標準品
500mg    Polyoxyl Oleate    9004-96-0     油酸聚烴氧酯標準品
ATCC細胞

 

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