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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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腫瘤細(xì)胞的分離和制作

時(shí)間:2018-3-7閱讀:131
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人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種腫瘤細(xì)胞結(jié)合緊密,不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖,即使采用1mm3的組織塊,也只有少量處于周邊的細(xì)胞可能生存和生長(zhǎng),若需獲取大量細(xì)胞,必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi),使細(xì)胞解離出來(lái),常采用的方法如下:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法  
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,Z簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘,若懸液量大,可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間,但速度不能太高,延時(shí)也不能太長(zhǎng),以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞,離心沉淀用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次,用培養(yǎng)基洗一次后,調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),若選用懸液中某些細(xì)胞,常采用離心后的細(xì)胞分層液,因?yàn)椋?jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。不同比重的分層液的配制和具體分離方法詳見(jiàn)淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)的章節(jié)。
二、實(shí)體組織材料的分離方法  
對(duì)于實(shí)體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)   機(jī)械分散法
所取材料若纖維成分很少,如腦組織,部分胚胎組織可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散組織細(xì)胞或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)(用九號(hào)針),使細(xì)胞通過(guò)針頭壓出,或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物壓擠(常用注射器鈍端)使細(xì)胞從網(wǎng)孔中壓擠出。此法分離細(xì)胞雖然簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大,而且細(xì)胞分散效果差。此法僅適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法   組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀),應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使腫瘤細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng),使團(tuán)塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時(shí)再采用機(jī)械
法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散,制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液,接種培養(yǎng)后,細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
Gadodiamide     釓雙胺標(biāo)準(zhǔn)品    131410-48-5     500mg
Clioquinol    氯碘羥喹標(biāo)準(zhǔn)品    130-26-7    500mg
Noscapine     那可丁標(biāo)準(zhǔn)品    128-62-1     500mg
Docusate Calcium  
磺基丁二酸-1,4-二(2-乙基己基)酯鈣鹽標(biāo)準(zhǔn)品 128-49-4    500mg
Butylated Hydroxytoluene    丁羥甲苯標(biāo)準(zhǔn)品    128-37-0    500mg
Pyruvic Acid     丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品    127-17-3     500mg
Potassium Acetate (AS)    醋酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品    127-08-2     500mg
Sucrose Octaacetate    蔗糖八乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品    126-14-7     500mg
Prednisolone Sodium Phosphate     潑尼松龍磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品    125-02-0     500mg
Hydroquinone    氫醌標(biāo)準(zhǔn)品    123-31-9     500mg
腫瘤細(xì)胞

 

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