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干細胞轉染 ,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。那么具體的實驗方法是什么呢?小編百思不得其解!費了好大勁去請教了技術老師,好東西大家要一起分享,于是今天小編決定把細胞轉染技術以HeLa細胞為例整理出來,分享給大家。
HeLa細胞傳代入24孔板3個孔,1ml10%FBS胎牛血清的DMEM培養,密度以使其第2天能生長至70%左右面積為宜。
1.轉染液的配制:
A液:2×1µl lipofectamine Gibco 滴入 2×50µl無血清培基中,混勻后靜置。
B液:9.36µl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36µlβ-gal-siRNA (4рmol/μl)分別與50µl無血清培基混勻后靜置。
2、待A液靜置5分鐘時,取50µlA液分別滴入B液的兩組中?;靹?,靜置15分鐘時,開始準備細胞。
3、棄掉原細胞培養液,用2ml 1×PBS加入培養皿中,前后左右傾斜培養皿,洗細胞一次,盡量吸凈PBS。轉染混合液中分別補100µl無血清培養基混勻,馬上滴入洗好的細胞上。靜置約2分鐘,放入37℃孵箱中。另設細胞陰性對照組,只用無血清培基處理。
4、轉染后4小時,補800ml 15%FBS的DMEM,放入37℃孵箱中。
6.轉染后70小時準備侵襲實驗。步驟見*部分,不同之處在于Matrigel為1mg/ml 30µl。
7.干細胞侵襲實驗觀察12小時后,取出染色。
鑒別 泛影酸 100021-198102 對照品 200mg
HPLC法含量測定 格隆溴銨(曾用名:甘羅溴銨) 100022-200403 對照品 100mg
鑒別 谷氨酸 100023-198601 對照品 50mg
檢查 磺胺 100024-198702 對照品 50mg
含量測定 磺胺甲噁唑 100025-199503 對照品 50mg
HPLC法含量測定 磺胺嘧啶 100026-200402 對照品 100mg
含量測定 炔諾孕酮 100028-199907 對照品 100mg
含量測定 甲萘醌 100029-200009 對照品 50mg
檢查 甲巰咪唑 0030-200504 對照品 100mg
HPLC法含量測定用 甲氧芐啶 100031-200304 對照品 100mg
含量測定 己酸羥孕酮 100032-198501 對照品 50mg
干細胞
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