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干細(xì)胞鋪板的實(shí)驗(yàn)技巧分享

時(shí)間:2018/7/24閱讀:309
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     做干細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是我們常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但有時(shí)候鋪得不是很均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂。下面為大家分享幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

      盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時(shí)間。

    96孔板一般以100 微升每孔接種,直接用100 微升移液器吸取細(xì)胞懸液,沿孔壁(稍離開一點(diǎn)孔底即可,不要離底太高)直接接入,移液器不需*打到大,輕輕按下即可,每鋪完一行換一次槍頭同時(shí)輕輕混勻細(xì)胞懸液。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。

      6孔板、12孔板或24孔板,可采用將每個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動浸潤整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會平鋪在整個(gè)孔底,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒有96孔板好掌握,效果沒有96孔板好。

培養(yǎng)瓶里面加好干細(xì)胞以后(比如傳代好/分好細(xì)胞以后),先順時(shí)針搖晃3次,馬上逆時(shí)針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復(fù)延X軸Y軸分別水平搖動3次。

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干細(xì)胞

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