手机版av在线_96精品国产aⅴ在线观看_中文字幕35页_国产亚洲成AV人片在线观黄桃_全黄性色大片_免费视频h

上海研生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第10年

15201736385

腫瘤細(xì)胞裂解方法

時(shí)間:2018/3/20閱讀:630
分享:

腫瘤細(xì)胞使用說明:
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的Z終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對(duì)于組織樣品:
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的Z終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,腫瘤細(xì)胞可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
對(duì)照品    尿苷    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    環(huán)維黃楊星D    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    蘇氨酸     100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    組氨酸    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    黃山藥皂苷提取物    200mg    對(duì)照品
對(duì)照品    積雪草苷    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    羥基積雪草苷    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    甜菜堿    50mg    對(duì)照品
對(duì)照品    雪上一枝蒿甲素    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    琥珀酸    20mg    對(duì)照品
腫瘤細(xì)胞

 

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国产清纯91天堂在线观看 | 中文字幕888 | 99精品热在线在线观看视频 | 天堂а在线最新版在线 | 91性视频| 91精品国产乱码久久久软件 | 一区二区国产视频 | 日韩一区二区三区高清免费看看 | 国产九色sp调教91 | 久久九九免费视频 | 91成人免费版 | 91九色丨porny丨交换 | 中文字幕日韩一级 | 日本字幕在线观看 | 久久精品99久久 | 色七七久久影院 | 日韩在线1 | 999www人成免费视频 | 永久免费无码国产 | 中国伊人网 | av二区在线观看 | 国产在线xxxx| 666av视频导航 | 国产高清毛片 | 亚洲av日韩av永久无码不卡 | 色国产精品一区在线观看 | 久久精品人妻无码一区二区三区 | 五月天狠狠色 | 精品国产99久久久久久 | 中国一级黄色片子 | 久久久久久草 | 午夜精品久久久久久不卡av | 狠狠色成人综合网 | 永久黄网站色视频免费 | 69黄色片 | 国产精品自产拍在线观看55 | 草莓AV福利网站导航 | 久久人人爽天天玩人人妻精品 | 狠狠色丁香婷婷综合潮喷 | 成人在色线视频在线观看免费大全 | 久草视频精品 |