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原代細胞技術(shù)及原理

時間:2017/10/24閱讀:230
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原代細胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時行的。細胞穿過流式細胞儀的激光束集點時使激光發(fā)生散射,分析散射光可以提供細胞大小及結(jié)構(gòu)的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種,前向散射光的強度與細胞大小、體積相產(chǎn),右向角射光的強度與細胞結(jié)構(gòu)的析射性、顆粒性(granu-larity)有關(guān)。

細胞凋亡過程中出現(xiàn)的形態(tài)改變?nèi)缂毎櫩s、胞膜起泡、核濃縮和碎裂等可以使光散射特性發(fā)生改變。早期凋亡細胞主要表現(xiàn)為前向散射光減弱而右向角散射光增強或不變,前者反映了細胞的皺縮,后者反映了細胞的核逐縮及碎裂。晚期凋亡細胞的前向散射光和右向角散射光均減弱。

由于光散射牧場生并非凋亡細胞的特異性指標,細胞的機械性損傷和細胞壞死也可以使前向散射光減弱。因此,只有將光散射特性的檢測與熒光參數(shù)的檢測結(jié)合起來才能準確地辨認凋亡細胞。

細胞凋亡過程中核酸內(nèi)切酶在DNA分子核小體間的降解,導(dǎo)致小分子DNA漏出,核DNA含量下降,細胞熒光染色后作流式細胞儀分析,可以發(fā)現(xiàn)在DNA直方圖上正常二倍體細胞的Go/G1峰前出現(xiàn)一個亞二倍體峰(xub-G1峰,即AP峰--apoptotic peak),代表凋亡細胞。

根據(jù)此亞二倍體峰可以計算凋亡細胞的百分率。此外,原代細胞還可以通過測定線粒體膜的電位、溶酶體質(zhì)子泵的活性及細胞DNA/總蛋白質(zhì)比例等方法辨認凋亡細胞。

檢測方法:獲取密度1×106細胞/ml左右的細胞懸液,精洗,固定,熒光染料染色,上流式細胞儀分析。
含量測定    比沙可啶    100181-200402    50mg
含量測定    雌二醇    100182-200404    100mg
含量測定    醋酸氯己定    100183-201003    50mg
檢查用    2,6-二甲基酚    100186-200201    50mg
含量測定    氟尿嘧啶    100187-200602    100mg
含量測定    環(huán)戊噻嗪    100188-199701    50mg
含量測定    甲基多巴    100189-199501    50mg
原代細胞

 

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