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原代細胞污染處理流程

時間:2017/6/15閱讀:420
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原代細胞污染處理流程
1、將污染的培養液倒掉,轉燒瓶口,加入10 mlPBS,適當晃動清洗培養瓶,然后倒掉。轉燒瓶口。

2、繼續加入10mlPBS,同樣方法晃動,清洗培養瓶,然后倒掉。

3、繼續加入5mlPBS,同樣方法洗瓶,主要是培養面,然后倒掉。

4、重復步驟3再洗。

5、重復步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

7、原代細胞加入3ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

9、加入10ml培養液,加入2ml雙抗,放置培養箱培養,5小時之后,倒掉培養基,加入PBS洗瓶兩次,然后加入胰酶消化,吹打后置于離心機800-1000r/min離心,然后洗一次。置于新的培養瓶里培養,培養體系加入2ml雙抗。

10、24h之后,視情況換液,若仍然污染嚴重,培養基渾濁,重復以上步驟,若看不到污染物,則繼續步驟1)、3)、4)、6)、8),然后加入培養液培養,培養體系加入2ml雙抗。

11、24h之后,若仍污染嚴重,可再重復一次,若還污染只能棄之(不過一般沒有出現這種情況),若鏡下不見污染物,則換液PBS洗瓶,原代細胞正常培養。

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