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微載體培養(yǎng)操作要點分析

時間:2017/4/1閱讀:466
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1.細胞系培養(yǎng)初期:保證培養(yǎng)基與微球體處于穩(wěn)定的PH與溫度水平,接種細胞(對數(shù)生長期,而非穩(wěn)定期)至終體積1/3的培養(yǎng)液中,以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量,更高的微載體濃度需要控制環(huán)境或經常換液。

2.貼壁階段(3-8d)后,緩慢加入培養(yǎng)液至工作體積,并且增加攪拌速度保證*均質混合。

3.培養(yǎng)維持期:進行細胞計數(shù)(胞核計數(shù))、葡萄糖測定及細胞形態(tài)鏡檢。隨意細胞系增殖,微球變得越來越重,需增加攪拌速率。經過3d左右,培養(yǎng)液開始呈酸性,需換液:停止攪拌,讓微珠沉淀5min,棄掉適宜體積的培養(yǎng)液,緩慢加入新鮮培養(yǎng)液(37℃),重新開始攪拌。

4.收獲細胞:首先排干培養(yǎng)液,至少用緩沖液漂洗1遍,然后加入相應的酶,快速攪拌(75-125r/min)20-30min。然后解離收集細胞及其產品。

5.微載體培養(yǎng)的放大:可以通過增加微載體的含量或培養(yǎng)體積進行放大。使用異倍體或原代細胞系培養(yǎng)疫苗、干擾素,已被放大至4000L以上。

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