當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>原代細(xì)胞>>小鼠原代細(xì)胞>> 原代小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞
組織來源 | 椎間盤組織 | 貨號(hào) | GOY-01X1288 |
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產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
生長特性 | 貼壁 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介:
小鼠椎間盤纖維環(huán)分離自椎間盤組織;椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個(gè)密封體。上下有軟骨板,是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織,能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚,而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強(qiáng)大的前縱韌帶,后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細(xì)胞密度為9000個(gè)細(xì)胞/mm3,其外層的細(xì)胞呈梭型,主要屬于纖維細(xì)胞,內(nèi)層細(xì)胞呈圓形,主要屬于軟骨細(xì)胞。在培養(yǎng)的情況下,用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn),它們的核較圓,核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多,為橢圓形,有的可看到雙層單位膜,由單位膜包繞初級(jí)深酶體和次級(jí)深酶體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒,纖維環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,保證纖維環(huán)生理代謝活動(dòng)所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少,纖維環(huán)的生物性能就會(huì)減弱,椎間盤開始退變。
方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-中性dan白酶聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 原代小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞 | 英文名稱 | Mouse Intervertebral Disc Fibroblast Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X1288 |
組織來源 | 椎間盤組織 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,
2) 從胸部解剖乳鼠,取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中,盡可能的除去結(jié)締組織等,
3) 取肺邊緣部分,剪碎,將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中,倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中,
4) 2h后,培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基,小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱,確保組織塊不會(huì)飄起來,
5) 每3d換液2mL,待細(xì)胞從組織塊中爬出來后,隔2d換液,待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí),去除組織塊,將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
1、您收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作:
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,再加入培養(yǎng)液終止消化,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)用適當(dāng)量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBS:DMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無菌離心管中,滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞,然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中;
3)放置于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 |
大鼠杏仁核神經(jīng)元細(xì)胞 | 反芻獸艾利希體(反芻獸埃立克體)染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠成纖維細(xì)胞 | 里氏埃里希氏體染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠基質(zhì)細(xì)胞 | 查菲艾利希體(查菲埃立克體)染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠上皮細(xì)胞 | 弗格森艾利希體(弗格森埃立克體)染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠嗅鞘細(xì)胞 | 艾利希體屬(埃立克體屬)通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠嗅球神經(jīng)干細(xì)胞 | 細(xì)小病毒B19 染料法熒光定量PCR試劑盒 |
人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫細(xì)胞 | 克羅諾桿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠牙髓干細(xì)胞 | 漏斗狀帶絳蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠牙齦成纖維細(xì)胞 | 豬麻疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
大鼠牙齦上皮細(xì)胞 | 巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠牙周膜成纖維細(xì)胞 | 桿狀巴爾通體染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠牙周膜干細(xì)胞 | 原代小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞伊麗莎白巴爾通體染料法熒光定量PCR試劑盒 |
大鼠眼外肌成纖維細(xì)胞 | 漢氏巴爾通體(漢塞巴爾通體、貓抓病、貓抓熱)染料法熒光定量PCR試劑盒 |
甲型流感病毒N6亞型(IAV-N6)檢測試劑盒(熒光PCR法) | 五日熱巴爾通體染料法熒光定量PCR試劑盒 |
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