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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>原代細(xì)胞>>小鼠原代細(xì)胞>> 原代小鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)
組織來(lái)源 | 外周血 | 貨號(hào) | GOY-01X1261 |
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產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 細(xì)胞形態(tài) | 樹突狀 |
生長(zhǎng)特性 | 半貼半懸浮 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠外周血DC分離自外周血,由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。DC細(xì)胞,全稱樹突狀細(xì)胞(DC),是近年來(lái)倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細(xì)胞(APC),能攝取、加工及呈遞抗原,啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。由美國(guó)學(xué)者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn),從脾臟中分離出一類與粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞形態(tài)和功都不同的白細(xì)胞,因其細(xì)胞膜向外伸出,形成與神經(jīng)細(xì)胞軸突相似的膜性樹狀突起,故而命名為樹突狀細(xì)胞。未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞,處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血DC采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 原代小鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞) | 英文名稱 | Mouse Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X1261 |
組織來(lái)源 | 外周血 | 細(xì)胞形態(tài) | 樹突狀 |
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) 樹突狀
傳代特性 屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,
2) 從胸部解剖乳鼠,取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中,盡可能的除去結(jié)締組織等,
3) 取肺邊緣部分,剪碎,將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中,倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中,
4) 2h后,培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基,小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱,確保組織塊不會(huì)飄起來(lái),
5) 每3d換液2mL,待細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)后,隔2d換液,待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí),去除組織塊,將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
1、您收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存:
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,再加入培養(yǎng)液終止消化,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1500rpm/min,離心5min;
3)用適當(dāng)量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBS:DMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過(guò)夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無(wú)菌離心管中,滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞,然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中;
3)放置于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP | 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過(guò)表達(dá));DG6-VAP33-GFP |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;DMS153 | 鴨肝炎病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
人乳腺癌細(xì)胞(上皮粘性蛋白基因修飾);Ecad231-9 | 牛腸道病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(HNP抗性);HNPMEF(CF-1) | 鯉皰疹病毒3型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆;L-929[L929] | 真鯛虹彩病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 |
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞;HCT116-GFP | 鯉皰疹病毒2型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
人乳腺癌細(xì)胞(上皮粘性蛋白基因修飾);Ecad231-7 | 鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;NTERA-2 | 肺炎克雷伯菌染料法熒光定量PCR試劑盒 |
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);LA1-GFP | 鴨肝炎病毒1型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過(guò)表達(dá));LA1-VAP33-GFP | 鴨肝炎病毒2型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
人乳腺上皮細(xì)胞;MCF-10A | 鴨肝炎病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
人乳腺癌細(xì)胞(紅色熒光蛋白標(biāo)記);MDA-MB-231-Red3 | 毛細(xì)線蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
人結(jié)腸癌細(xì)胞;NCI-H508 | 原代小鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)平尾毛細(xì)線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 |
小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP | 捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 |
禽戊型肝炎(HEV)檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 封閉毛細(xì)線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 |
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