原代人角膜內皮細胞

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介：

公司實驗室分離的人角膜內皮采用混合膠原酶消化結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的人角膜內皮經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1. 組織塊培養法

組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶（或皿）中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

2. 消化培養法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和 非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀 變成 絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠 瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。

3. 懸浮細胞培養法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

4. 器官培養

器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

1. 取材的組織要盡快培養。如若不能及時培養，可將組織浸泡于培養液內，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。

2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區域取材，可用含500～1000u/ml的青BSS液漂洗5～10min，或用10%注射液沖洗浸泡10min再作培養。

3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養的1～2d內要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染，一旦發現，要及時清除。