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產(chǎn)地 | 進(jìn)口 | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
組成及試劑配制:
1、奧利華斯病毒PCR檢測試劑盒廠家酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價(jià)格 |
奧利華斯病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
GP39 ELISA Kit植物延展素-β軟骨糖蛋白39(GP39)ELISA試劑盒
CHODL ELISA Kit內(nèi)皮素-1抗體軟骨凝集蛋白(CHODL)ELISA試劑盒
CRTAP ELISA Kit絲裂原活化蛋白激酶4抗體軟骨關(guān)聯(lián)蛋白(CRTAP)ELISA試劑盒
MFGE8 ELISA Kit埃茲蛋白抗體乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)ELISA試劑盒
Maspin ELISA Kit細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體絲抑蛋白(Maspin)ELISA試劑盒
BRCA2 ELISA Kit內(nèi)皮素-1單克隆抗體癌易感蛋白2(BRCA2)ELISA試劑盒
BRCA1 ELISA Kit腸道病毒71型抗體癌易感蛋白1(BRCA1)ELISA試劑盒
BCAR1 ELISA Kit抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體癌抗雌激素藥物耐藥性基因1(BCAR1)ELISA試劑盒
LTF ELISA Kit表皮生長因子抗體乳鐵傳遞蛋白(LTF)ELISA試劑盒
LCT ELISA Kit表皮生長因子抗體乳糖酶(LCT)ELISA試劑盒
LDHC ELISA Kit磷酸化真核翻譯延長因子2抗體乳酸脫氫酶C(LDHC)ELISA試劑盒
LDHB ELISA Kit真核延伸因子激酶2抗體乳酸脫氫酶B(LDHB)ELISA試劑盒
CPT2 ELISA Kit磷酸化真核延伸因子激酶2抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶2(CPT2)ELISA試劑盒
CPT1B ELISA Kit真核啟動因子2α抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1B(CPT1B)ELISA試劑盒
CPT1A ELISA Kit磷酸化一氧化氮合成酶3抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A(CPT1A)ELISA試劑盒
CT2 ELISA Kit真核翻譯延長因子2抗體肉毒堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(CT2)ELISA試劑盒
CRAT ELISA Kit癌基因ERG3抗體肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CRAT)ELISA試劑盒
CORT ELISA Kit豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體肉毒堿-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(CORT)ELISA試劑盒
FUS ELISA KitFAS凋亡抑制分子3抗體融合蛋白(FUS)ELISA試劑盒
SLC3A2 ELISA Kit纖維束1抗體溶質(zhì)載體家族3成員2(SLC3A2)ELISA試劑盒
SLC39A6 ELISA Kit叉頭蛋白P3抗體溶質(zhì)載體家族39成員6(SLC39A6)ELISA試劑盒
SLC30A8 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體I溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)ELISA試劑盒
SLC26A4 ELISA Kit叉頭蛋白M1抗體溶質(zhì)載體家族26成員4(SLC26A4)ELISA試劑盒
SLC1A5 ELISA Kit磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)ELISA試劑盒
SLC16A3 ELISA Kit磷酸化粘著斑激酶抗體溶質(zhì)載體家族16成員3(SLC16A3)ELISA試劑盒
SLC16A1 ELISA Kit絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體溶質(zhì)載體家族16成員1(SLC16A1)ELISA試劑盒
LPCAT4 ELISA Kit肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶4(LPCAT4)ELISA試劑盒
LPCAT3 ELISA Kit凝血因子13抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶3(LPCAT3)ELISA試劑盒
LPCAT2 ELISA Kit濾泡樹突細(xì)胞分泌蛋白抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶2(LPCAT2)ELISA試劑盒
LPCAT1 ELISA Kit纖維母細(xì)胞生長因子13抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPCAT1)ELISA試劑盒
LPEAT1 ELISA Kit骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體溶血磷脂酰乙醇胺酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPEAT1)ELISA試劑盒
LPIAT ELISA Kit口蹄疫病毒A型抗體溶血磷脂酰肌醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LPIAT)ELISA試劑盒
LPGAT1 ELISA Kit腎刷狀緣抗體溶血磷脂酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPGAT1)ELISA試劑盒
LPAR3 ELISA KitFLAG Tag標(biāo)簽抗體溶血磷脂酸受體3(LPAR3)ELISA試劑盒
LPAR1 ELISA KitFAM166A蛋白抗體溶血磷脂酸受體1(LPAR1)ELISA試劑盒
LYPLA3 ELISA Kit脂肪酸合成酶抗體溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)ELISA試劑盒
LYPLA2 ELISA Kit腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體溶血磷脂酶Ⅱ(LYPLA2)ELISA試劑盒
LYPLA1 ELISA Kit磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體溶血磷脂酶Ⅰ(LYPLA1)ELISA試劑盒
NLN ELISA Kit粘著斑激酶抗體溶神經(jīng)素(NLN)ELISA試劑盒
ACP2 ELISA Kit凝血因子5抗體溶酶體酸性磷酸酶2(ACP2)ELISA試劑盒
LAMP2 ELISA Kit成纖維細(xì)胞生長因子10抗體溶酶體關(guān)聯(lián)膜蛋白2(LAMP2)ELISA試劑盒
LAMP1 ELISA KitXIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體溶酶體關(guān)聯(lián)膜蛋白1(LAMP1)ELISA試劑盒
CGα ELISA Kit羊抗人纖維蛋白原抗體絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)ELISA試劑盒
CG ELISA KitFas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒
VIL1 ELISA KitF-box蛋白38抗體絨毛蛋白1(VIL1)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
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