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測(cè)定意義

脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶，催化底物通過系統(tǒng)被氧化，釋放的能量供機(jī)體使用，是生物體取得能量的一種方式。

測(cè)定原理

在細(xì)胞呼吸過程中，氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在脫氫酶作用下接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF呈現(xiàn)紅色，于485nm測(cè)定其吸光值，即得脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品

天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請(qǐng)用戶自備）。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

骨架銜接蛋白BIN3抗體Human GEF-H1 ELISA Kit小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）ELISA試劑盒,

雙向染色體分裂蛋白1抗體Human GDPD5 ELISA Kit小鼠P物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒,

轉(zhuǎn)錄因子Brn3蛋白抗體Brn3αHuman GFPT1 ELISA Kit小鼠25羥基3（25（OH）D3/25 HVD3）ELISA試劑盒,

骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體Human GDPD2 ELISA Kit大鼠嗜酸性粒陽離子蛋白（ECP）ELISA試劑盒,

腦鈉素抗體Human GEFT ELISA Kit大鼠水通道蛋白5（AQP-5）ELISA試劑盒,

骨形態(tài)發(fā)生蛋白3抗體Human GEM ELISA Kit大鼠6酮前列腺素（6-K-PG）ELISA試劑盒,

抑凋亡基因bag1抗體Human GEMIN5 ELISA Kit大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA/TGAB）ELISA試劑盒,

蛙皮素受體3抗體Human GEMIN4 ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原端肽（PⅢNT）ELISA試劑盒,

脫氫酶(DHA)可見分光光度法檢測(cè)試劑盒胎兒血紅蛋白(HBF)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

山羊抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

組織蛋白S(CTSS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠白介素12(IL-12/P70)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠載脂蛋白A5(apo-A5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

豬鐵蛋白(FE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

雞肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠胱天蛋白9(Casp-9)免疫試劑盒*直銷

大鼠酰基轉(zhuǎn)移(LCAT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠新喋呤免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。