細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

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商品介紹：

使用方法：

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

培養操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

大鼠 IL18R1 基因全長ORF克隆

大鼠 IL17RA 基因全長ORF克隆

大鼠 IL21R 基因全長ORF克隆

大鼠 IL17RB 基因全長ORF克隆

大鼠 IL20RB 基因全長ORF克隆

大鼠 IL13RA1 基因全長ORF克隆

大鼠 IL12RB2 基因全長ORF克隆

大鼠 IL10RB 基因全長ORF克隆

大鼠 IL10Ra 基因全長ORF克隆

大鼠 TNFRSF1A 基因全長ORF克隆

前列腺癌細胞：LNCaP clone FGC phospho-SYN1(Ser62+Ser67)  磷酸化神經突觸素1抗體 0.1ml

RNF11  環指蛋白11抗體 規格: 0.2mlMAS1  GTP結合蛋白MAS1抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗羊IgM 規格: 0.1ml

HHV4/CMV  人類巨細胞毒抗體 規格: 0.2ml

Cdc25B  細胞分裂周期蛋白25B抗體 規格: 0.1ml

FANCG  DNA損傷修復基因XRCC9抗體 規格: 0.1ml

CDC37L1  細胞分裂周期37樣蛋白1抗體 規格: 0.2ml

ELF1/E74 like factor 1  轉錄因子ELF1抗體 規格: 0.2mlMAP4K4  絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體 規格: 0.1ml

H Cadherin/CDH13  心臟鈣粘蛋白抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的小鼠抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml

NRIP  雄激素受體復合物相關蛋白抗體（核受體相互作用蛋白） 規格: 0.2ml

2 ug pHT43 pHT43 低溫運輸，-20℃保存

副溶血性弧菌成套生化鑒定管（HRGB）  10種*2套/盒*5盒