實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    腦髓母細胞瘤細胞：D283 Med 

別稱D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283

種屬人類

年齡（性別）男性，6歲

組織來源小腦

生長特性半貼壁半懸浮

細胞形態上皮細胞樣

背景描述D283 Med細胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6歲患有神經管細胞瘤有腹腔轉移的白人男性小孩的腹水細胞。

生物安全等級1

生長培養基MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:2-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~ 52 小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO?，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.) Yes, in soft agar

基因表達情況The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity)

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

人 TLR10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 SMURF2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 TGF-beta 1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠 PD1 / PDCD1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 CTSB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

小鼠 CD274 / B7-H1 / PD-L1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 LRG1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

人

腦髓母細胞瘤細胞：D283 Med 10U 無機焦（酵母） Pyrophosphatase, Inorganic(yeast) -20℃保存

2 ug pBD-NF-κB pBD-NF-κB 低溫運輸，-20℃保存

肉膏酵母葡萄糖瓊脂  250g

25mL 聚乙二醇溶液 Poly(Ethylene Glycol Solution) 4℃保存

100mL 甲酰胺 Formamide     4℃保存

phospho-GCN2 (Thr667)  磷酸化蛋白激GCN2蛋白抗體 規格: 0.1ml

Rabbit anti-MG IgG/Gold  膠體金標記的兔抗爪沙鼠IgG 規格: 0.5ml

factor V  凝因子5抗體 規格: 0.1ml

SPARCL1/Ecm2  細胞外基質蛋白2抗體 規格: 0.2ml

HMGCL  三羥基三甲基輔A裂解抗體 規格: 0.2mlIL-9  白介素9抗體 規格: 0.1ml

SART3  T淋巴細胞識別的鱗狀細胞SART3抗體 規格: 0.2ml

Phospho-Smad2(Thr220)  磷酸化細胞信號轉導分子SMAD2抗體 規格: 0.1ml