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| 貨號 | GOY-01X0900 |
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 兔脊髓神經(jīng)元細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0900 |
商品介紹：
名稱 兔脊髓神經(jīng)元細胞 2.組織來源：脊髓組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 兔脊髓神經(jīng)元細胞分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結構，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區(qū)，主要由神經(jīng)細胞構成；在灰質區(qū)周圍為白質區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結構和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內含神經(jīng)絲、微管、內質網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內質網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內含有大量膠質細胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d，細胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強。培養(yǎng)20d后，死亡細胞明顯增加，細胞出現(xiàn)內空泡，突起粗細不均，甚至脫壁，發(fā)生細胞崩解。 5.方法簡介： ()實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元細胞采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-Rb055 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
1瓶 A2細胞株 A2 低溫運輸和保存 78-5000 pg/mL 牛白血病病毒(BLV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
1臺 分子雜交爐 Hybridization Oven 常溫 0.78-50 ng/mL 人絨毛膜生長素(Choriomammotropin)ELISA試劑盒
100次 總抗氧化能力檢測試劑盒（FRAP法） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Alanine aminotrans
兔脊髓神經(jīng)元細胞1個 暗盒（8×10英寸） Cassette 室溫
HIST1H2AH 組蛋白H2A/S抗體 規(guī)格: 0.2ml
PCGF1 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CP110 中心體蛋白110抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內皮細胞受體蛋白激A3+A4+A5抗體 規(guī)格: 0.1ml
NR1/NMDAR1 受體1抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Tau protein(Ser396) 磷酸化微管相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
HOXB4 HOXB4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
100次 磁珠血液DNAout MAG Blood DNAOUT 磁珠4℃保存，蛋白K溶液-20℃保存（勿反復凍融）
UCN2/Urotensin II 尾加壓素2抗體 規(guī)格: 0.1ml
APOJ/Clusterin 載脂蛋白J抗體 規(guī)格: 0.1ml
100mL DNTris HCl，1M，pH7.0
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