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測(cè)定意義

DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長(zhǎng)方面有重要的作用。

測(cè)定原理

采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過(guò)測(cè)定還原糖含量的變化來(lái)計(jì)算DBE活性。

需自備的的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

人縮Bacillus coagulans色素P4502E1檢測(cè)試劑盒

人L-乳酸脫氫Bacillus coagulans色素P450c21A;21-羥化檢測(cè)試劑盒

人酸性神經(jīng)鞘磷脂Bacillus coagulans外基質(zhì)金屬蛋白誘導(dǎo)因子檢測(cè)試劑盒

人花生四烯酸5脂加氧Bacillus coagulans外基質(zhì)糖蛋白檢測(cè)試劑盒

人5脂加氧Bacillus cohnii外信號(hào)調(diào)節(jié)激檢測(cè)試劑盒

人腺苷酸環(huán)化1Paenibacillus ehimensis外信號(hào)調(diào)節(jié)激檢測(cè)試劑盒

人可溶性腺苷酸環(huán)化Bacillus diffusus纖維連接蛋白檢測(cè)試劑盒

人脫羧Bacillus firmus因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1檢測(cè)試劑盒

淀粉脫分支酶（DBE）可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒小鼠解整合素樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒*直銷

大鼠白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠血栓前體蛋白(TpP)免疫試劑盒*直銷

大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒*直銷

基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠孕酮受體(PROGR)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

抗卵巢抗體(AOAb)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

甘肽過(guò)氧化(GSH-Px)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。