實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    小鼠結腸平滑肌細胞

2.組織來源：結腸組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠結腸平滑肌細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內環形、外縱行平滑?。唤Y腸運動少而緩慢，對刺激的反應也較遲緩。結腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質分泌、誘發全身炎癥反應以及細胞內信號轉導途徑等研究中起著重要的作用。結腸平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。結腸平滑肌運動活性受到神經遞質、胃腸激素和藥物等因素的調節。隨著現代胃腸動力學研究的進展，對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發展到細胞、分子水平，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學等實驗。體外培養細胞，由于影響因素單一，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎。

5.方法簡介：

()實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-M044

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態成纖維細胞樣

傳代特性可傳3代左右

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

2 ug pFR-Luc pFR-Luc 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 侵襲性大腸桿菌(EIEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

0.5%葡萄糖肉湯培養基（2015藥典） 0.5% Glucose Brother Medium 250g 31.2-2000 pg/mL 人乳腺肽裂合(Lactoylglutathione lyase)ELISA試劑盒

1瓶 BT-474 [BT474]細胞株 BT-474 [BT474] 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL 志賀氏菌(S

小鼠結腸平滑肌細胞phospho-ATXN1(Thr236)  磷酸化失調癥蛋白1抗體 規格: 0.1mlPhospho-Ret (Tyr1062)  磷酸化指狀蛋白RET抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.1ml

Cathepsin L/CTSL  組織蛋白L抗體 規格: 0.1ml

100次 細菌RNAout Bacterial RNAOUT 4℃保存

HEPACAM  肝細胞粘附分子抗體 規格: 0.2mlP73 protein  P73瘤抑制基因抗體 規格: 0.1ml

50T 彈狀病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

NFAT1/NFATc2  核因子活化T細胞胞漿蛋白2抗體 規格: 0.1ml

ICOS-L/B7-H2/CD275  誘導協同刺激分子配體CD275抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy5.5  Cy5.5標記的兔抗豚鼠IgM 規格: 0.1ml

2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低溫運輸，-20℃保存

Rabbit anti-MG IgG whole serum  兔抗爪沙鼠IgG抗清 規格: 1mlET-1(2C4)  內皮素-1單克隆抗體 規格: 0.2ml