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ELISA的主要常用類型及步驟

時間:2019/3/27閱讀:286
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ELISA試劑盒的主要常用類型及步驟

1. 間接法測抗體

間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結合的

受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:

1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原,洗滌除去未結合的抗原及雜質。

2)加稀釋的樣本,保溫反應。樣本中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。

經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3)加酶標抗抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結合,從而間接地標記上酶。洗滌后

,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關。

4)加底物顯色。

2.競爭法測抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定

,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標

本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物

等ELISA測定多用此法。

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