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elisa定量檢測試劑盒實驗的操作要點

時間:2017/8/3閱讀:388
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的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證elisa定量檢測試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異。
一、標本的采取和保存
   可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
二、試劑的準備
   按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
三、加樣
   在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
四、保溫
   在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在elisa定量檢測試劑盒中似不恰當。五、 洗滌
   洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。
六、顯色和比色
(一) 顯色
   顯色是ELISA中的后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物。
(二)比色
   比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色。
Anti-IFN-γ     規格:    規格:     0.1ml    產品名稱:    鼠抗人干擾素-γ/IFN-gamma單克隆抗體
Anti-IFN-γAnti-Human      規格:    規格:     0.1ml    產品名稱:    干擾素-γ抗體
Anti-IFN-γAnti-mouse、rat      規格:    規格:     0.1ml    產品名稱:    干擾素-γ抗體 
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Anti-IGC       規格:    規格:     1ml    產品名稱:    兔抗非洲爪蟾IGC抗體
Anti-IGF-1 R       規格:    規格:     0.1ml    產品名稱:    胰島素樣生長因子-I受體抗體

 

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